RNA熒光原位雜交(ISH)
技術(shù)原理
技術(shù)原理 SEERNA?ISH RNA熒光原位檢測是基于信號放大的單分子 RNA 熒光原位雜交技術(shù),通過配對設(shè)計的 DNA 連接探針(DLPs)與靶標(biāo) RNA 分子互補配對結(jié)合,然后使用具有以RNA為模板進行DNA連接能力的連接酶,進行 DLPs 的第一步連接成半環(huán);之后以互補的 DNA 為模板,在 Splint連接酶的作用下實現(xiàn) DLPs 的成環(huán);隨后在 DNA 聚合酶的作用下,進行滾環(huán)擴增反應(yīng)實現(xiàn)信號放大;最后在滾環(huán)擴增產(chǎn)物上,雜交帶有單個熒光基團標(biāo)記的檢測探針,進行熒光顯微拍照成像。
實驗流程
(1)樣本前處理
冰凍樣本:切片退凍、固定、脫水和透化等,以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進入;
FFPE樣本:烤片、脫蠟、復(fù)水、固定、復(fù)性、透化和脫水等。
(2)探針雜交與滾環(huán)擴增:探針與RNA雜交之后連接成環(huán),通過滾環(huán)擴增放大信號;
(3)熒光成像:檢測探針攜帶特定熒光基團,與靶標(biāo)基因雜交探針特異性結(jié)合,在顯微鏡下選擇合適的熒光濾塊和曝光 時間進行掃描成像,通過識別熒光信號確定該位置靶向結(jié)合的基因;
(4)圖像分析:在組織圖像中標(biāo)記每個靶基因,可以進行信號點計數(shù)分析。
產(chǎn)品優(yōu)勢
(1) 高效、特異、高敏
(2) 高信噪比
(3) 可實現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測
(4) 亞細(xì)胞分辨率
技術(shù)優(yōu)勢
產(chǎn)品性能
- 單RNA分子檢測
- 探針設(shè)計特異性強
- 5~10對探針/靶標(biāo)、靈敏度高
- 信號放大、信噪比高
熒光通道
- DAPI 通道、GFP/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy7 通道均適用
- (Alexa Fluor 488/Cy3/Texas Red/Cy5/Alexa Fluor 750)
樣本和靶標(biāo)
靶標(biāo):同時檢測1~4個靶標(biāo)RNA(mRNA、LncRNA、circRNA、可變剪切等)
樣本:細(xì)胞爬片、新鮮冰凍OCT包埋組織切片(FF) 、福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織切片和固定后冰凍組織切片
檢測結(jié)果展示
送樣要求
- 細(xì)胞爬片
- 新鮮冰凍OCT包埋組織切片(FF)
- 福爾 馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織切片
- 固定后冰凍組織切片