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RNA原位測(cè)序技術(shù)服務(wù)(ISS)|
In Situ Sequencing,ISS
新型RNA原位測(cè)序作為空間組學(xué)技術(shù)之一,在完整組織切片上以亞細(xì)胞分辨率定量單細(xì)胞內(nèi)的高度多重RNA表達(dá)水平,具有亞細(xì)胞空間分辨率、基因檢出靈敏度高和組織全景覆蓋等優(yōu)點(diǎn),是一種完美結(jié)合組織、細(xì)胞和分子不同層面信息的前沿技術(shù),在器官發(fā)育、神經(jīng)科學(xué)、腫瘤免疫等研究領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)原理


技術(shù)原理 原位測(cè)序技術(shù) (In Situ Sequencing,ISS) 依賴于雙連接和滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù),它是以缺口靶向(Gap-targeted Sequencing) 或條形碼靶向 (Barcode-targeted Sequencing) 為測(cè)序策略,同時(shí)引入邊連接邊測(cè)序的化學(xué)原理(Sequencing-by-ligation Chemistry),以滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物為測(cè)序媒介進(jìn)而在組織或細(xì)胞原位對(duì)RNA實(shí)現(xiàn)短片段測(cè)序的技術(shù)。

技術(shù)流程

(1)定制探針:針對(duì)用戶提供的基因的非保守區(qū)設(shè)計(jì)探針并合成

(2)樣本前處理:將冰凍切片退凍、固定、脫水和透化,以便探針和反應(yīng)所需的酶等成分進(jìn)入組織細(xì)胞內(nèi)部

(3)探針雜交與滾環(huán)擴(kuò)增:探針與RNA雜交,之后連接成環(huán);通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)放大編碼信號(hào)

(4)原位成像:利用邊合成邊測(cè)序的化學(xué)原理,通過(guò)采集熒光信號(hào)得到對(duì)應(yīng)位置的編碼堿基;經(jīng)過(guò)序列解碼,可識(shí)別出該位置靶向結(jié)合的基因

(5)圖像分析:獲得每個(gè)靶基因在組織中的空間表達(dá)位置,用不同符號(hào)(或顏色)標(biāo)記在同一張組織圖像中;通過(guò)細(xì)胞邊界識(shí)別等方法得到單細(xì)胞水平的基因表達(dá)定量數(shù)據(jù),可進(jìn)行高級(jí)分析

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

(1)高效、特異、高敏

(2)高信噪比

(3)可實(shí)現(xiàn)256種靶標(biāo)分子檢測(cè)

(4)亞細(xì)胞分辨率


技術(shù)優(yōu)勢(shì)

數(shù)據(jù)分析


應(yīng)用思路

應(yīng)用場(chǎng)景

檢測(cè)結(jié)果展示
人胰腺樣本50基因原位測(cè)序結(jié)果
樣本類型
  1. 冷凍組織OCT包埋樣本或者切片
  2. 石蠟包埋組織樣本或者切片(FFPE樣本) 
  3. 細(xì)胞爬片樣本等