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單細(xì)胞免疫組庫(kù)
Single Cell Immune Profiling
單細(xì)胞免疫分析解決方案可以在單細(xì)胞水平獲得全長(zhǎng)、配對(duì)的 V(D)J 序列,獲得樣本的免疫組庫(kù),以便發(fā)現(xiàn)和疾病相關(guān)的抗體類型。
技術(shù)原理

(10x Genomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組為例)


1. 形成GEMs 基于微流控芯片形成油包水(GEMs),每個(gè)油包水內(nèi)含有一個(gè)細(xì)胞、一個(gè)gel bead以及逆轉(zhuǎn)錄需要的引物試劑和酶等,單個(gè)GEM內(nèi)可進(jìn)行獨(dú)立逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)互不干擾。 

2. 標(biāo)記細(xì)胞和RNA分子 Gel bead上帶有標(biāo)簽,GEMs進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,可將10x barcode(10x BC,用來(lái)標(biāo)記細(xì)胞)、UMI(標(biāo)記本底R(shí)NA進(jìn)行定量)加在每個(gè)mRNA分子上。

3. 巢式PCR富集全長(zhǎng)V(D)J序列 基于T細(xì)胞和B細(xì)胞VDJ序列設(shè)計(jì)巢式PCR引物,富集全長(zhǎng)V(D)J序列

實(shí)驗(yàn)流程

     血液/組織   單細(xì)胞/核懸液                          GEMs形成             文庫(kù)構(gòu)建                  測(cè)序                      數(shù)據(jù)處理               數(shù)據(jù)可視化分析

 

(10x Genomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組為例)

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1)可實(shí)現(xiàn)成對(duì)的重鏈和輕鏈(B細(xì)胞)或α和β鏈(T細(xì)胞)的全長(zhǎng)測(cè)序;
2)精細(xì)到單細(xì)胞水平,能獲得大量單細(xì)胞的免疫組庫(kù)數(shù)據(jù);
3)同批樣本可同時(shí)獲得mRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)和免疫組庫(kù)數(shù)據(jù);


單細(xì)胞平臺(tái)兼容性


數(shù)據(jù)分析

分析流程



分析結(jié)果展示
                       單細(xì)胞質(zhì)控                                       克隆型分析                                        轉(zhuǎn)錄組和TCR/BCR聯(lián)合分析


研究方向

1)抗體的鑒定和新抗體的發(fā)現(xiàn)
2)揭示Ig 庫(kù)的發(fā)展,繪制全局Ig 庫(kù)
3)研究傳染性疾病,如感染發(fā)展中的抗體進(jìn)化譜系等
4)研究免疫失調(diào)疾病的V(D)J 重組傾向性,尋找免疫失調(diào)疾病的標(biāo)記物
5)癌癥早期檢測(cè)、癌癥進(jìn)程和復(fù)發(fā)診斷的標(biāo)記物以及腫瘤免疫機(jī)制的研究

文獻(xiàn)案例

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